ELISA試劑盒法檢測研討

ELISA試劑盒基因現(xiàn)已整合到銀耳基因組中；RT-PCR成果顯現(xiàn)，在銀耳細胞中可以動物ELISA試劑盒檢測到人胰島素基因的mRNA；Southern雜交成果表明人胰島素基因以單復制的方式整合到銀耳基因組DNA中。本試驗經(jīng)過設置農(nóng)桿菌與銀耳芽孢不同共培育時刻、誘導劑乙酰丁香酮的濃度、銀耳芽孢及農(nóng)桿菌ELISA試劑盒濃度等要素對轉(zhuǎn)化功率影響，成果在乙酰丁香酮濃度為500μmol/mL、銀耳芽孢濃度為108個/mL、農(nóng)桿菌OD=0.5及共培育時刻為2d時，轉(zhuǎn)化功率zui高，為310個轉(zhuǎn)化子/108個銀耳芽孢。轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)接5代后對潮霉素仍有抗性，說明外源基因在銀耳芽孢中可以不亂遺傳。在試驗室已開始樹立的農(nóng)桿菌EHA105介導銀耳轉(zhuǎn)基因辦法的基礎上。
ELISA試劑盒以銀菌株Tr21-01為動身菌株，經(jīng)過凍融法將帶著有潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（Hph）基因為遺傳符號及人胰島動物ELISA試劑盒素基因（BAC）為意圖基因的質(zhì)粒pBHg-BCA導入根癌農(nóng)桿菌GV3101，LBA4404和AGL-1中，并進一步介導轉(zhuǎn)究。試驗結(jié)L-1具有較高的轉(zhuǎn)化率；GV3101轉(zhuǎn)化率較低，且假陽性較高；LBA4404無抗性菌落長出。此成果表明不同的農(nóng)桿菌侵染銀耳芽孢才能具有差異性，且對受體侵染具有一定的特異性。本試驗以農(nóng)桿菌EHA105為參照菌株，ELISA試劑盒對農(nóng)桿菌AGL-1介導轉(zhuǎn)化銀耳進行研究。基于農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)基因受許多要素的影響，本試驗從農(nóng)桿菌與銀耳芽孢共培育時刻、銀耳芽孢濃度、農(nóng)桿菌濃度、誘導劑乙酰丁香酮（AS）的濃度、轉(zhuǎn)率等方面進行優(yōu)化。ELISA試劑盒其轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化成果為：AGL-1菌液OD值為0.4～0.5，AS誘導培育濃度為250μg/mL、共培育濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL，共培育72h轉(zhuǎn)化率zui高，可達500個/10~8，且陽性菌落為89%；EHA105菌液OD值為0.4～0.5。